110 (Segunda Sección) DIARIO OFICIAL Lunes 2 de junio de 2008
8.6.4 Medio de cultivo para el ensayo
Medio para prueba de ácido fólico.
Preparar el volumen necesario en un matraz Erlenmeyer de vidrio de 1000 ml. Proceder según las
indicaciones de la etiqueta, calentando la solución en una parrilla con agitación magnética.
Cálculo del volumen necesario:
patrón: 30 tubos 30 x 5 ml = 150 ml
cada producto: 10 tubos 10 x 5 ml = 50 ml
+ 50 ml a 100 ml de exceso
8.6.5 Preparación del ensayo
8.6.5.1 Serie patrón
En un soporte metálico para tubos de ensaye, colocar 3 filas de 10 tubos (180 x 18 mm), numerados bl,
0,..., 8; el primero corresponde al blanco.
Mediante una pipeta vertir en triplicado en las tres series de tubos, volúmenes crecientes de la última
dilución de la solución patrón, completar a 5 ml con agua destilada y mediante una bureta o una jeringa
automática, añadir 5 ml de medio de cultivo para el ensayo según la tabla siguiente:
Tubo No.
bi
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Sol.
Patrón:
0,0
0,0 0,25 0,50 0,75 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 ml
Agua: 5 5,0 4,75 4,5 4,25 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0
Medio de
cultivo
5 ml en cada tubo
Los tubos del ensayo en blanco (bl) no se inoculan.
8.6.5.2 Serie producto
En otro soporte colocar dos filas de 10 tubos (180 x 18 mm). Los primeros cinco tubos de ambas filas van
destinados a un producto, los otros cinco de ambas filas, a otro producto. Numerar de 9 a 13 y de 14 a 18 y
así sucesivamente para todos los productos analizados.
Mediante una pipeta verter en duplicado en ambas series de cinco tubos, volúmenes crecientes de la
última dilución de la solución de la muestra, completar a 5 ml con agua destilada y añadir 5 ml de medio de
cultivo para el ensayo.
Tubo No. 9 10 11 12 13
Sol. de la muestra:
0,25
0,5 0,75 1,0 1,5 ml
Agua: 4,75 4,5 4,25 4,0 3,5
Medio de cultivo 5 ml en cada tubo
Tapar los tubos con capuchones o mediante una tapa adecuada que cubra ambas filas de tubos en el
soporte.
8.6.6 Esterilización del ensayo
Esterilizar los tubos durante 10 min a 121°C, luego enfriarlos en un baño de agua fría.
8.6.7 Inoculación
8.6.7.1 Preparación y estandarización del inóculo
Justo antes de inocular el ensayo, transvertir una cantidad suficiente del cultivo preparado bajo 8.6.1 a un
tubo de centrífuga estéril, centrifugar a 2600 rpm durante 5 min, decantar y resuspender el paquete celular en
10 ml de solución salina. Hacer dos lavados más. Transvertir a una cubeta de 1 cm y efectuar la lectura en el
espectrofotómetro a 575 nm. Estandarizar el cultivo a fin de obtener siempre aproximadamente la misma
extinción. No debe olvidarse sustraer de la extinción del cultivo la del medio de ensayo, que es un medio
coloreado.
