Lunes 2 de junio de 2008 DIARIO OFICIAL (Segunda Sección) 109
8.5.4 Solución patrón
Pesar exactamente 50,0 mg de ácido fólico (ácido pteroilglutámico), disolver en agua destilada en un
matraz aforado de vidrio de 500 ml, añadir 50 ml de NaOH 0,1 N, 100 ml de alcohol y llevar a volumen con
agua destilada.
Conservar esta solución a 4°C durante máximo 6 meses.
8.6 Procedimiento
El ácido fólico es fotosensible. Por lo tanto, para todas las soluciones que contienen dicha vitamina se
debe utilizar material de vidrio actínico o cubrir el material de vidrio corriente con papel de aluminio o un paño
negro.
8.6.1 Desarrollo del microorganismo
Un día antes, subcultivar en 10 ml de caldo Micro Inoculum (8.4.3).
Incubar durante 18 h a 35°C.
Seis horas antes de la inoculación del ensayo, inocular 2 gotas (aproximadamente 0,1 ml) del último
cultivo de 18 h en otro tubo de 10 ml de caldo Micro Inoculum.
Incubar durante 6 h a 35°C.
8.6.2 Preparación de la toma de ensayo
8.6.2.1 Productos sin almidón
En un matraz Erlenmeyer de 250 ml, pesar de 1 a 3 g de muestra homogénea, que contenga
aproximadamente 1 µg de ácido fólico. Disolver en 30 ml de solución tampón pH 6,1 (8.5.2). A fin de evitar la
formación de grumos, añadir la solución tampón en pequeñas cantidades pasando el matraz Erlenmeyer bajo
el grifo de agua caliente.
Cubrir el matraz con papel de aluminio y colocar en el autoclave durante 20 min a 102°C. Enfriar.
Transvertir cuantitativamente a un matraz aforado de vidrio de 100 ml. Añadir al contenido del matraz 0,8
ml de solución de cloruro de calcio al 2% y agitar. Dejar reposar durante 15 minutos, luego llevar a volumen
con agua destilada. Filtrar a través de un filtro plisado con velocidad de filtración media.
Diluir el filtrado de modo que se obtenga una solución de aproximadamente 0,2 ng de ácido fólico por ml.
8.6.2.2 Productos con almidón
Proceder según el primer apartado bajo 8.6.2.1.
Antes de colocar la solución en el autoclave, añadir una cantidad de mezcla al 6% de α-amilasa
pancreática en lactosa, correspondiente a 1% de la toma de ensayo.
Incubar durante 30 min a 42°C. Cubrir el matraz con papel de aluminio y colocar en el autoclave durante
20 min a 102°C. Enfriar. A continuación transvertir cuantitativamente a un matraz aforado de vidrio de 100 ml y
proseguir como se describe en 8.6.2.1
Nota: Con cada nuevo lote de diastasa efectuar un ensayo en blanco.
Mediante una pipeta tomar 10 ml de solución patrón (8.6.3) dilución d. Añadir 30 ml de agua. Añadir 100
mg de mezcla al 6% de α-amilasa pancreática en lactosa. Incubar durante 30 min a 42°C. Transvertir
cuantitativamente a un matraz aforado de 100 ml. Llevar a volumen y filtrar.
La curva de calibración obtenida con esta solución debe ser comparable a aquella obtenida con la solución
patrón no tratada.
8.6.3 Solución patrón 0,2 ng/ml
Justo antes del uso diluir la solución 8.5.4 como sigue:
10 ml a 100 ml
10 ml a 100 ml
2 ml a 100 ml
10 ml a 100 ml
10 ml a 100 ml = 0,2 ng/ml
